Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的檢測細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法，試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8，在日本，美國，歐洲等國家地區(qū)均持有專利，同仁化學(xué)研究所于2006年在中國獲得了WST-8的注冊商標(biāo)。

CCK-8法與普通的MTT法相比，具有特點：

★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好

★操作簡便，省時省力

★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞

★無需放射性同位素和有機溶劑，對細(xì)胞毒性低

★為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用

★適合于高通量篩選

CCK-8用途：篩選、細(xì)胞增殖測定、細(xì)胞毒性測定、藥敏試驗

CCK-8試劑盒在國內(nèi)知名科研院所、重點大學(xué)、三甲醫(yī)院被廣泛應(yīng)用，國際認(rèn)可度高，使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達(dá)600多篇，其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇，比較高IF26.5分。 CCK-8的檢測靈敏度高于其他方法.南京成纖維細(xì)胞增殖染色

有機溶劑溶解）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測靈敏度高很高很高高檢測時間較長較短較短**短檢測波長560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低，細(xì)胞形態(tài)不變試劑穩(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、CCK8檢測細(xì)胞增殖/毒性的方法實驗一：細(xì)胞增殖分析1、制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計數(shù)2、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù)，每孔約100ul細(xì)胞懸液，同樣的樣本可做3個重復(fù)。3、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)2-4小時，如果不需要貼壁，這步可以省去。4、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻?；蛘咧苯优渲煤?0%CCK8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。5、培養(yǎng)1-4小時:細(xì)胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認(rèn)比較好條件。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少，需要較長的顯色時間（5-6小時）。6、測定450nm吸光度：建議采用雙波長進行測定。精原細(xì)胞增殖的方法細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征。

從G1末期到S初期、細(xì)胞內(nèi)迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核苷酸。S期主要特點是利用G1期準(zhǔn)備的物質(zhì)條件完成DNA復(fù)制，并合成一定數(shù)量的組蛋白，供DNA形成染色體初級結(jié)構(gòu)。在S期末，細(xì)胞核DNA含量增加一倍，為細(xì)胞進行分裂作了準(zhǔn)備。DNA復(fù)制一旦受到障礙或發(fā)生錯誤，就會阻擋細(xì)胞的分裂或引起變異，導(dǎo)致異常細(xì)胞或畸形的發(fā)生。S期持續(xù)時間大約7～8小時。G2期DNA合成后期這一時期的主要特點是為細(xì)胞分裂準(zhǔn)備物質(zhì)條件。DNA合成終止，但RNA和蛋白質(zhì)合成又復(fù)旺盛，主要是組蛋白、微管蛋白、膜蛋白等的合成，為紡錘體和新細(xì)胞膜等的形成備足原料。若阻斷這些合成，細(xì)胞便不能進入有絲分裂。G2期歷時較短而恒定，哺乳動物細(xì)胞一般為1～1.5小時。

RIPA細(xì)胞裂解液

RIPA裂解液是較可靠的緩沖液之一，其主要成分含1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，該緩沖液能夠從細(xì)胞質(zhì)，膜和核蛋白質(zhì)中提取蛋白質(zhì)，并且與許 多應(yīng)用相容，包括蛋白質(zhì)分析，和蛋白質(zhì)純化。RIPA緩沖液不含蛋白酶或磷酸酶，如果需要，可將酶添加到試劑中以防止蛋白質(zhì)水解并維持蛋白質(zhì) 的磷酸化狀態(tài)。一些蛋白激酶和其他酶可能對RIPA緩沖液的組分敏感，導(dǎo)致其活性降低。 在這種情況下，準(zhǔn)備不含脫氧膽酸鈉和SDS的RIPA緩沖液。

注意事項：

1.抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進行。

2.裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不建議用Bradford 法測定蛋白濃度，可以選用BCA蛋白定量試劑盒測定蛋白濃度。

3.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會出現(xiàn)一小團透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實驗；如果需要檢測和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實驗。如果檢測一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFKB、p53等時，通常不必進行超聲處理，就可以檢測到這些轉(zhuǎn)錄因子。 CCK法的檢測靈敏度很高，甚至可以測定較低細(xì)胞密度。

T細(xì)胞增殖試驗類型(1)形態(tài)法：其原則是將外周血液或分離的單個細(xì)胞與適量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培養(yǎng)72h，取培養(yǎng)細(xì)胞作涂片染色鏡檢。據(jù)細(xì)胞的大小、核與胞漿的比例、胞漿的染色性和核結(jié)構(gòu)以及有無核仁等特征，分別計數(shù)淋巴母細(xì)胞、過渡性母細(xì)胞和核有絲分裂相以及成熟的小淋巴細(xì)胞，以前三者為轉(zhuǎn)化細(xì)胞，每份標(biāo)本計數(shù)200個細(xì)胞，計算轉(zhuǎn)化率。  (2)核素法：絕大多數(shù)外周血T細(xì)胞通產(chǎn)處于細(xì)胞周期的G0期，受特異性抗原或促有絲分裂原后，從G0期進入G1期，開始合成蛋白質(zhì)、RNA和DNA前體物質(zhì)等，為DNA復(fù)制準(zhǔn)備物質(zhì)基礎(chǔ)，然后進入S期，細(xì)胞合成DNA量倍增，此時若在培養(yǎng)液中加入3H標(biāo)記的TdR，后者摻入新合成的DNA中，據(jù)摻入的多少推測細(xì)胞增殖程度。機體創(chuàng)傷愈合、組織再生、病理組織修復(fù)等，都要依賴細(xì) 胞增殖。沈陽tnk細(xì)胞增殖毒性測定試劑盒

細(xì)胞增殖的研發(fā)途徑。南京成纖維細(xì)胞增殖染色

上海儒安生物科技有限公司轉(zhuǎn)膜液

產(chǎn)品簡介：

我們生產(chǎn)的Western轉(zhuǎn)膜液(Western Transfer Buffer)可以用于Western時濕法電轉(zhuǎn)膜，是一種快速效率高的特有配方轉(zhuǎn)膜液，效果較好。

轉(zhuǎn)印快速——室溫轉(zhuǎn)膜，20-30 分鐘內(nèi)將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜上。

轉(zhuǎn)印效率高——產(chǎn)生熱量非常小，減少蛋白損失。

配置靈活——配置1*轉(zhuǎn)膜液時加入無水甲醇、無水乙醇均可，效果沒有明顯差異，兼容性好。

使用方法：

 1* 快速轉(zhuǎn)膜液的配制(1000 ml)：

 取100ml 此產(chǎn)品+800 ml 去離子水+100ml甲醇。

電轉(zhuǎn)儀的設(shè)置：

一個轉(zhuǎn)印槽：電壓：110V,  電流：400mA；

二個轉(zhuǎn)印槽：電壓：140V，電流：700mA；

100kD 以下蛋白，膠濃度＜10%的，轉(zhuǎn)印時間20分鐘即可轉(zhuǎn)印完畢。

100kD 以上蛋白，膠濃度≥10%的，轉(zhuǎn)印時間30分鐘即可轉(zhuǎn)印完畢。南京成纖維細(xì)胞增殖染色

上海儒安生物科技有限公司位于真南路4268號2幢J1718室，交通便利，環(huán)境優(yōu)美，是一家生產(chǎn)型企業(yè)。公司是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，以誠信務(wù)實的創(chuàng)業(yè)精神、專業(yè)的管理團隊、踏實的職工隊伍，努力為廣大用戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品。以滿足顧客要求為己任；以顧客永遠(yuǎn)滿意為標(biāo)準(zhǔn)；以保持行業(yè)優(yōu)先為目標(biāo)，提供高品質(zhì)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體。上海儒安生物科技順應(yīng)時代發(fā)展和市場需求，通過高端技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體。